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PCR實(shí)驗(yàn)指的是基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn),其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加,是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,PCR實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域,例如:艾滋病檢測(cè),乙型肝炎,禽疫病,癌基因的檢測(cè)和診斷,DNA指紋,個(gè)體識(shí)別,親子鑒定及法醫(yī)物證等等。華測(cè)實(shí)驗(yàn)室今天就PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)、建設(shè)要求和要點(diǎn)進(jìn)行詳解。
一.PCR實(shí)驗(yàn)室布局
原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū),樣品制備區(qū),擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域,并設(shè)有走廊,各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的,各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志,不能直通,如果緊密連接,需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū),后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū),即從:試劑準(zhǔn)備區(qū)——樣品制備區(qū)——PCR擴(kuò)增室——產(chǎn)物分析室,不得逆向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū),不得逆向流動(dòng)。各工作區(qū)頂部應(yīng)該安裝紫外燈,紫外燈波長(zhǎng)為254mm,每20㎡一支40W的紫外燈。
二.實(shí)驗(yàn)室各區(qū)功能及主要設(shè)備
1. 試劑準(zhǔn)備區(qū):主要進(jìn)行試劑的制備,分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。本區(qū)主要設(shè)備有天平,冰箱,離心機(jī),加樣器,振蕩器等。對(duì)于氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求,一般為+10Pa。
2. 樣品制備區(qū):主要進(jìn)行樣品的保存,核酸提取,貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定DNA的合成。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱,生物安全柜,離心機(jī),加樣器,振蕩器等。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?,以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染,一般為+10Pa。
3. 擴(kuò)增區(qū):主要進(jìn)行DNA擴(kuò)增。此外,已制備的DNA模板(來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準(zhǔn)備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)主要設(shè)備有:擴(kuò)增儀,冰箱,離心機(jī),加樣器等。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免氣溶從本區(qū)漏出一般為-25Pa。
4. 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū):擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定。本區(qū)主要設(shè)備有酶標(biāo)儀,洗板機(jī).加樣器和水浴箱等。本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,一般為-25Pa,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域