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臨床級干細(xì)胞庫是標(biāo)準(zhǔn)化收集、處理、儲存、檢測和分發(fā)不同來源的干細(xì)胞以及與干細(xì)胞相關(guān)的臨床、病理、治療、隨訪、知情同意等資料,并進(jìn)行質(zhì)量控制、信息管理與應(yīng)用的專門機構(gòu)或部門。以下是環(huán)揚實驗室對臨床級干細(xì)胞的建設(shè)與管理的詳細(xì)分析:
規(guī)劃
臨床級干細(xì)胞庫的規(guī)劃需綜合考慮多方面因素,如國家政策導(dǎo)向、區(qū)域干細(xì)胞醫(yī)療市場需求、技術(shù)發(fā)展、建設(shè)的必要性、生產(chǎn)條件、經(jīng)濟效益、社會效益、風(fēng)險等,進(jìn)行評價、分析和論證,以確定其可行性。
臨床級干細(xì)胞庫建設(shè)應(yīng)遵循國家法律法規(guī)及國際干細(xì)胞研究協(xié)會相關(guān)倫理原則,樣本采集與干細(xì)胞存儲須遵守《人類遺傳資源管理暫行辦法》,在人類遺傳資源辦批準(zhǔn)的范圍內(nèi)開展工作。
選址
臨床級干細(xì)胞庫應(yīng)選擇安全、無干擾的獨立與封閉區(qū)域,遠(yuǎn)離嚴(yán)重污染(空氣、水、病原微生物、放射性同位素等),遠(yuǎn)離振動/噪聲。
盡可能毗鄰樣本采集與臨床治療點,減少樣本的轉(zhuǎn)運時間,便于及時處理與制備,實現(xiàn)流程無縫對接。
存儲區(qū)優(yōu)先選擇地面以上較低樓層,避免雨水/洪水倒灌,防霉防潮,保持良好的溫濕度。
功能區(qū)規(guī)劃與管理
細(xì)胞制備的潔凈區(qū)域應(yīng)具備緩沖區(qū)、更衣室,滿足細(xì)胞的分離、擴增與培養(yǎng),各制備套間周圍設(shè)置潔凈的走廓,增加流程的靈活性。
細(xì)胞制備操作區(qū)應(yīng)設(shè)立潔凈區(qū),根據(jù)《GB50073潔凈廠房設(shè)計規(guī)范》,潔凈區(qū)面積規(guī)劃一般為2~4m2/人,潔凈區(qū)滿足GMP要求,其設(shè)計、建設(shè)、管理、進(jìn)出、使用、清潔、消毒、環(huán)境檢測等參見《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》無菌藥品附錄。干細(xì)胞制劑的生產(chǎn)必須在B級背景下的潔凈區(qū)完成。
根據(jù)功能需求杜絕污染,必要時設(shè)置隔離區(qū),避免隔離區(qū)的空氣進(jìn)入其他區(qū)域。為減少不同批次細(xì)胞在研究中的變異性,在制備階段應(yīng)對同一批特定代次的細(xì)胞建立多級細(xì)胞庫區(qū),庫區(qū)應(yīng)防止混淆、差錯和交叉污染。
核心功能區(qū):涵蓋樣本與細(xì)胞收發(fā)室、制備與處理室、存儲區(qū)、質(zhì)檢室與總控室,必要時設(shè)置接待征詢室和采集室。
輔助功能區(qū):包括辦公室、會議室、檔案室、庫房及洗消室等。
流程與流向:布局的流程與流向應(yīng)合理有序并明確標(biāo)識,設(shè)置人員、物料、細(xì)胞、污物流向與醫(yī)療廢棄物專用通道,確保生物安全,減少污染風(fēng)險。為了便于樣本、試劑、物料與細(xì)胞制劑按規(guī)定的流程和流向傳遞,可在入口與出口處合理設(shè)置傳遞窗,提高工作效率。
人員配備
應(yīng)建立與業(yè)務(wù)相適應(yīng)的組織架構(gòu),明確管理路徑、職責(zé)、權(quán)限及相互關(guān)系,配備相應(yīng)資質(zhì)(職稱、學(xué)歷、培訓(xùn)和實踐經(jīng)驗)的操作人員和管理人員。
對人員培訓(xùn)、考核并評估效果,采集人員需經(jīng)培訓(xùn)合格并持有醫(yī)師或護(hù)士執(zhí)業(yè)證書,采集信息雙人復(fù)核;制備人員應(yīng)進(jìn)行無菌服穿戴的培訓(xùn);制備、質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人與質(zhì)量受權(quán)人不得相互兼任。如個別崗位職責(zé)需委托他人,受委托人應(yīng)同樣滿足該崗位職責(zé)的資質(zhì)要求,委托人仍然承擔(dān)最終責(zé)任。
設(shè)施與設(shè)備
應(yīng)為所有設(shè)施設(shè)備設(shè)計充足合理的空間,根據(jù)各區(qū)域面積及功能規(guī)劃供暖、通風(fēng)(自然/壓力)、空調(diào)、水電、照明、滅菌、監(jiān)控、溫濕度、氧濃度、消防、污水與醫(yī)療廢棄物處理系統(tǒng)等,并定期清潔、維保、校準(zhǔn)和質(zhì)檢,制定應(yīng)急預(yù)案。
存儲庫區(qū)應(yīng)充分考慮樓面承重,設(shè)施設(shè)備規(guī)劃與安全管理遵循《ISBER最佳實踐2018》,如配備雙路供電或應(yīng)急發(fā)電設(shè)施及備用存儲空間、冷鏈監(jiān)控等;縮短液氮塔到庫區(qū)的距離,減少氮氣的耗損;液氮與干冰區(qū)域應(yīng)配備氣體監(jiān)測器、聲光報警和排風(fēng)系統(tǒng),一旦房間內(nèi)氧濃度低于設(shè)定的下按規(guī)定時間自動啟動強排風(fēng),液氮區(qū)地面杜絕使用磁磚,優(yōu)選耐低溫的環(huán)氧樹脂,冰箱區(qū)應(yīng)充分考慮散熱,必要時安裝專用散熱通道。操作人員應(yīng)配備厚型隔熱手套、護(hù)目鏡/面具以及防護(hù)外套以確保安全。
干細(xì)胞制劑的存儲須杜絕交叉污染,設(shè)置合格、待檢與不合格區(qū)且標(biāo)識明顯;集約設(shè)計監(jiān)控裝置,實現(xiàn)24小時溫度連續(xù)監(jiān)控及遠(yuǎn)程報警,確保液體供氣系統(tǒng)不間斷供氣及外置塔的安全運轉(zhuǎn)(儲存、調(diào)壓、氣化等),設(shè)置保護(hù)圍欄和安全警示標(biāo)識并定期安全檢查,校驗供氣管道與遠(yuǎn)程液位監(jiān)控系統(tǒng)。對于液氮補給罐或液氮輸送系統(tǒng)所有閥門、壓力表與安全閥應(yīng)定期檢查(年檢或強檢),確保系統(tǒng)連續(xù)平穩(wěn)、安全節(jié)氣。液氮設(shè)備的運行與維修人員應(yīng)具備《特種行業(yè)資格證》,可外包給專業(yè)公司進(jìn)行檢修。
所有設(shè)備應(yīng)建檔受控,專人管理且標(biāo)識明顯,分光光度計、移液器、天平、離心機等需定期進(jìn)行計量檢定與校準(zhǔn)。實驗室要備的安全設(shè)施(通風(fēng)櫥、防塵罩、滅火器、洗眼噴淋裝置等)應(yīng)定期進(jìn)行檢查。
采集管理
采集前需對供者進(jìn)行入組篩查和傳染病因子檢測,包括人類免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類嗜T細(xì)胞病毒、EB病毒、巨細(xì)胞病毒、梅毒螺旋體等。
篩查合格的供者簽署知情同意書后,遵循標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程采集樣本,將污染、感染和病原體傳播的風(fēng)險降低。
制備管理
臨床級干細(xì)胞的制備應(yīng)嚴(yán)謹(jǐn)、審慎并進(jìn)行獨立審查和監(jiān)督,確保其安全性和有效性。即使對細(xì)胞進(jìn)行最小的體外操作都有可能引入額外風(fēng)險,如病原體污染、培養(yǎng)代數(shù)增加導(dǎo)致的細(xì)胞基因型和表型不穩(wěn)定,在長期、壓力環(huán)境下可能會變?yōu)榉钦扼w或發(fā)生DNA重組、缺失及其他基因或表觀遺傳異常,從而帶來嚴(yán)重病理改變,如癌癥。
故臨床級干細(xì)胞的制備應(yīng)遵循GMP程序,防止原料和產(chǎn)品在生產(chǎn)過程中被污染,所有試劑與制備過程均應(yīng)遵守質(zhì)量控制體系與規(guī)程,確保試劑質(zhì)量、制備工藝與制定的方案保持一致,形成細(xì)胞鑒定、純度和潛能分析標(biāo)準(zhǔn)。而對于傳染病因子陽性的干細(xì)胞制備需在獨立設(shè)置的陽性間進(jìn)行。
檢驗管理
利用干細(xì)胞庫資源開展臨床研究必須遵循科學(xué)與倫理,保護(hù)受試者權(quán)益,符合《藥物臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范》、《干細(xì)胞臨床試驗研究管理辦法(試行)》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則(試行)》。
過程中的關(guān)鍵性物料必須做到先驗證性能,確保有效性且符合國家相關(guān)規(guī)定。直接與原始樣本及干細(xì)胞制劑接觸的物料必須無菌且對人體無害并符合要求的級別,盡可能使用藥用級別的物料。記錄使用的關(guān)鍵物料,確??赏暾麥?zhǔn)確地追蹤到每個環(huán)節(jié)中物料的詳細(xì)信息,包括使用的試劑/耗材/設(shè)備清單、生產(chǎn)廠家、批次號、合格證等,關(guān)鍵試劑如血清、酶和生長因子的分析證書(certificate of analysis,COA)副本,測試過程和結(jié)果等。
存儲管理
應(yīng)監(jiān)測生物安全柜、潔凈室的顆粒及生物負(fù)載系統(tǒng),包括高效微??諝膺^濾系統(tǒng)、A/B潔凈室內(nèi)的空調(diào)凈化系統(tǒng)。
應(yīng)規(guī)定監(jiān)測頻率和監(jiān)測項目,如靜態(tài)和動態(tài)下的懸浮粒子、沉降菌、浮游菌、表面微生物、壓差、風(fēng)速、溫濕度等。
對于B級背景下應(yīng)采用在線塵埃粒子監(jiān)測系統(tǒng)懸浮粒子。
定期清洗和更換初、中效過濾器,并定期在工作狀態(tài)下對高效過濾器進(jìn)行檢漏,以防止損傷和泄漏。
綜上所述,臨床級干細(xì)胞庫的建設(shè)與管理是一項復(fù)雜而細(xì)致的工作,需要綜合考慮多個方面。通過科學(xué)規(guī)劃、嚴(yán)格管理、先進(jìn)技術(shù)等方面的努力,可以確保臨床級干細(xì)胞庫的安全、高效和可持續(xù)發(fā)展。